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梯度PCR仪常见问题的主要解决方案分享

点击次数:225 发布时间:2022-09-26
   梯度PCR仪是一台小巧、可靠且经济的多孔PCR仪,非常适合小型实验室。有高分辨率超大彩色液晶显示屏,实验过程中实时显示温控及运行状态。用户可设置休眠模式使其更节电。
  梯度PCR仪常见问题的主要解决方案:
  1.梯度PCR仪在产物序列中引入了错误
  这是由于聚合酶忠实性低或者循环数太多,这时需要使用带有校正活性的热稳定聚合酶,同时降低循环数。此外,四种dNTP的浓度不同也会出现该问题,此时应制备新的浓度相同的dNTP混合物。
  2.PCR跑胶
  该现象表现为目的条带很亮,但是边沿不清楚,前后有拖尾现象。出现这样的问题,则需要进行细致的分析,因为引起该问题的可能很多。可先检查是否模板质量问题,如有降解等,模板应避免反复冻融。也有可能是抽提RNA时有污染,则需要重新抽提RNA。此外,也可能是非特异性扩增引发该问题,可提高退火温度,少循环次数。电泳缓冲液时间太长,ph值和盐离子浓度明显改变、电泳时电压太高、电泳液过久没换,电泳胶脏了等都可能引发该问题。如果不是由上述原因引起,则进一步检查加样量是否过大,制胶过程中胶孔是否制好,EB是否冲洗干净、模板中是否混有基因组DNA或蛋白等。也需考虑是否扩增的条件不合适。针对具体原因再采取相应的措施。
  3.对梯度PCR仪产物需要用凝胶纯化的时间掌控
  当凝胶分析扩增产物只有一条带时,则无需使用凝胶纯化;
  当可见其他杂带时,则可能是积累了大量引物的二聚体,在克隆前需要做凝胶纯化。
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