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电泳仪的毛细管柱制备方法介绍

点击次数:231 发布时间:2022-11-26
   毛细管凝胶电泳仪将凝胶电泳仪对生物大分子的分离能力与毛细管电泳仪的快速、微量和定量分析相结合,是当今分离度高的一种分离技术。将聚丙烯酰胺等在毛细管中交联生成凝胶,以凝胶作为载体进行电泳,凝胶具有多孔性,类似分子筛的作用,样品分子按大小分离。
  电泳仪的毛细管柱制备方法如下:
  1.检测窗口制备:
  毛细管的聚酰亚胺涂层不透明,检测窗口部位的聚酰亚胺必须剥离除去,剥离长度为2-3mm。常用剥离方法有硫酸腐蚀法、灼烧法和刀片刮除法。
  2.毛细管内壁修饰:
  用120℃热空气吹,然后用室温氨气冲洗2h,再用50%3-甲基丙烯酰氧丙基-三甲氧基硅烷充满12h,后用甲醇和水冲洗。
  3.缓冲溶液制备:
  将1.1g Tris和0.01g EDTA溶于100mlL 7M尿素溶液中,用NaH2PO4调至pH=8.6。
  4.单体溶液制备:
  将29g丙烯酰胺和1g N-甲叉双丙烯酰胺溶解在100mlL缓冲溶液中。
  5.催化剂制备:
  将0.2g过硫酸铵溶于2mL缓冲溶液中。
  6.凝胶溶液制备:
  将10mlL单体溶液加入到30mlL缓冲溶液中,用4μL催化剂溶液和2.5μL四甲基乙二胺(TEMED)预聚合45min。
  7.灌注聚合:
  将上述凝胶溶液注入毛细管到无气泡,将柱两端浸入缓冲溶液中聚合数小时。
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