蛋白稳定性分析仪得到的曲线图我们该如何分析？

点击次数：220 更新时间：2025-08-19

　　蛋白稳定性分析仪要在把蛋白放在逐渐升温的环境里，实时看它什么时候开始“散架”。仪器会输出一条曲线，横轴是温度，纵轴是荧光信号或光散射强度。读图的人只要抓住几个关键点，就能判断蛋白稳不稳。

　　一、两种常见信号

　　1.荧光信号：蛋白里有色氨酸。天然折叠时色氨酸被包在内部，荧光弱；温度升高后蛋白展开，色氨酸暴露，荧光迅速增强。

　　2.光散射：蛋白一旦聚集，颗粒变大，光散射值突增。

　　二、曲线长什么样

　　1.荧光曲线像一条缓慢上升的斜线，在某个温度突然跳高，形成“S”形。

　　2.光散射曲线先平后陡，像折线。两条曲线可叠加在同一张图里。

　　三、关键温度

　　1.Tm：荧光曲线中点对应的温度，表示一半蛋白已经展开。Tm越高，蛋白越稳定。

　　2.Tagg：光散射开始陡升的温度，表示开始聚集。Tagg比Tm低，说明蛋白先聚后展开，不稳定。

　　四、看图步骤

　　1.先看Tm：在软件里点一下中点，读出数值。野生蛋白Tm=60℃，突变体Tm=52℃，说明突变后稳定性下降。

　　2.再看Tagg：如果Tagg=55℃，Tm=60℃，两者差8℃，蛋白在展开前已开始聚集。

　　3.看曲线形状：曲线陡峭，说明协同性好，一次全部展开；坡度平缓，说明存在中间状态，可能部分折叠。

　　五、注意事项

　　1.蛋白浓度要统一，常用0.1–0.5 mg/mL，浓度高会提前聚集。

　　2.升温速率1℃/min常用，太快会低估Tm。

　　3.缓冲液pH和盐浓度保持一致，否则对比无意义。

　　4.每批样品测三次，Tm偏差在±0.5℃以内才可信。

　　蛋白稳定性分析仪的曲线图就是一张“温度-信号”折线图。找到Tm和Tagg两个数字，再比较它们的高低和距离，就能快速判断蛋白是否稳定、配方是否有效。