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梯度PCR仪操作时对不同模式建立的研究

点击次数:72 发布时间:2022-07-13
   梯度PCR仪是由普通PCR仪衍生出的带梯度PCR功能的基因扩增仪。PCR反应能否成功,退火温度是关键,梯度PCR仪每个孔的温度可以在一定范围内按照梯度设置,根据结果,一步就可以摸索出适宜的反应条件。一次性PCR扩增可以设置一系列不同的退火温度条件(通常12种温度梯度)的称之为梯度PCR仪。
  梯度PCR仪在一般操作时先打开PCR仪的热盖,插入0.2ml的样品管。盖好热盖。再打开PCR仪的电源,仪器程序开始初始化,需等待几分钟。
  如何为梯度PCR仪建立梯度模式?
  1.点中一个步骤,再点“Option”键;
  2.点“VeriFlex step”,出现梯度创建窗口,输入6个梯度温度,温度下方的“1-2”是指对应的1、2两行加热孔,全部输好后,点“Done”确定。注意相邻的两个梯度温度之差大不能超过5℃。
  梯度PCR仪渐变模式的建立:
  1.点中一个步骤,再点“Option”键;
  2.点“Auto Delta”,出现渐变模式创建窗口。点“Staring Cycle”,输入起始循环数;点“Delta Temperature”,输入温度变化值;点“Delta Time”,输入时间变化值。渐变模式适用于touchdown PCR,可以提高PCR反应的特异性。例如输入起始循环数为2,温度变化值为+0.5℃,时间变化值为+5s,则表示从第2个循环开始,每循环一次升温0.5℃,时间增加5s。
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