梯度PCR仪操作时对不同模式建立的研究
点击次数：1206 更新时间：2022-07-13
梯度PCR仪是由普通PCR仪衍生出的带梯度PCR功能的基因扩增仪。PCR反应能否成功，退火温度是关键，梯度PCR仪每个孔的温度可以在一定范围内按照梯度设置，根据结果，一步就可以摸索出适宜的反应条件。一次性PCR扩增可以设置一系列不同的退火温度条件（通常12种温度梯度）的称之为梯度PCR仪。
梯度PCR仪在一般操作时先打开PCR仪的热盖，插入0.2ml的样品管。盖好热盖。再打开PCR仪的电源，仪器程序开始初始化，需等待几分钟。
如何为梯度PCR仪建立梯度模式？
1.点中一个步骤，再点“Option”键；
2.点“VeriFlex step”，出现梯度创建窗口，输入6个梯度温度，温度下方的“1－2”是指对应的1、2两行加热孔，全部输好后，点“Done”确定。注意相邻的两个梯度温度之差大不能超过5℃。
梯度PCR仪渐变模式的建立：
1.点中一个步骤，再点“Option”键；
2.点“Auto Delta”，出现渐变模式创建窗口。点“Staring Cycle”，输入起始循环数；点“Delta Temperature”，输入温度变化值；点“Delta Time”，输入时间变化值。渐变模式适用于touchdown PCR，可以提高PCR反应的特异性。例如输入起始循环数为2，温度变化值为＋0.5℃，时间变化值为＋5s，则表示从第2个循环开始，每循环一次升温0.5℃，时间增加5s。
