质量光度计的比色过程要注意些什么？
点击次数：54 更新时间：2025-11-21
质量光度计常被用于实验室，它体积不大，却能在3分钟内告诉你样品里蛋白质、糖或重金属的精确浓度。可同一台仪器，有人测得数据漂亮，有人却连标准点都拉不直，问题多半出在“比色”这一步。比色不是“倒进去、按一下”那么简单，而是一场从器皿到温度、从时间到心态的“全程控”。
1.“干净”是比色的生命线
比色皿若有划痕或指纹，会在光路里形成散射点，吸光度瞬间虚高0.02 A；重金属检测时，这0.02 A可能把结果从“合格”推向“超标”。正确流程是新皿先用1+1硝酸泡30 min，再用纯水冲3遍；每次测试结束，立即用擦镜纸单向轻拭，绝不可来回蹭。
2.波长选错，努力白费
质量光度计的灯源是氙闪灯，能量在230 nm和260 nm处出现双峰。若用280 nm测蛋白，却把带宽设成5 nm，灯能量骤降60%，信噪比差，结果漂移。正确做法是先扫全谱找λmax，再把带宽缩到1 nm；如果λmax落在220 nm以下，果断换用石英皿，普通玻璃在240 nm的透过率已低于50%，相当于给光路加了“墨镜”。
3.时间温度，一个都不能放过
显色反应多是酶或氧化还原体系，对温度“敏感”。总酚测定在25℃时30 min显色完成，若实验室空调坏了，温度升到30℃，反应20 min就达到峰值，继续放置吸光度反而下降，曲线“掉头”。提前把试剂和样品在同一水浴恒温10 min，计时从加入最后一滴显色剂开始，才能确保每管经历“同一生化时钟”。
4.加样顺序，差1秒也“翻车”
磷酸盐测定的钼蓝法，需要先加钼酸铵，再还原剂。若先加还原剂，溶液里的抗坏血酸会把游离钼酸还原成杂多蓝，背景值飙升0.05 A。用排枪批量加样时，最好“纵向”操作，先给所有管加A液，再统一加B液，避免横向顺序带来的时间梯度。
5.读数窗口，错过就是“过期”
铬与二苯碳酰二肼的紫红色络合物在5 min内稳定，第6分钟开始褪色2%/min。把比色皿放进槽位后，别急着按“开始”，先“预读”3次，待数值漂移＜0.001 A/min再正式读数；若30 s内仍漂移，说明温度未平衡，继续等待比“硬测”更省时间。
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